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梯度洗脫可用于處理不能以等度洗脫分離的樣品，而更常見的使用梯度的因素是多成分保留能力不同，無法在等度洗脫中全洗脫出來，或以等度方式無法達到滿意的分離效果?？偨Y下來，以下幾種情況，可以采用梯度洗脫：

1、多組分樣品的極性范圍大，用等度無法全部洗脫的樣品；

2、大分子樣品；

3、改善峰峰型；

4、目標峰出峰后，短時間內提高有機相比例，洗脫強保留干擾雜質；

5、用等度洗脫無法達到分離的情況。

在檢測復雜成分的樣品時，往往存在些強保留物質，采用等度，無法把強保留的雜質洗脫下來，一針哪怕采集再久，也會有未知雜質干擾后面進樣的效果，這種情況下，可以增加梯度洗脫，使強保留成分在梯度上洗脫出來的方式來解決。

示例：

30分鐘開始，增加梯度洗脫，

以洗去強保留雜質，連續進樣，均無干擾

由上面三張圖可見，此中藥，在采用等度洗脫時，因有強保留未知雜質，連續進樣，會在后面的進樣出峰，干擾檢測。在待測成分出峰后，增加梯度，提高有機相比例，強保留物質在當針就洗脫下來，連續進樣確認，效果能完全重現，后面進樣不會出現未知干擾峰影響。

有些物質，特別是結構相近的物質，等度條件下無法達到分離，而采用梯度模式，因組分在有機相變化的選擇性差異，可以達到分離，這種情況下就需要采用梯度條件進行測試。

示例：