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在做樣分析過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)色譜峰圖異常的現(xiàn)象，比如前沿或者拖尾，這給我們的分析檢測(cè)造成了很大的困擾，而超載是導(dǎo)致峰形異常的原因之一，接下來(lái)首先介紹一下超載：

一、超載：

當(dāng)供試品進(jìn)樣量和進(jìn)樣體積在安全的范圍內(nèi)，改變進(jìn)樣量和體積會(huì)相應(yīng)地影響到峰高和峰面積，而保留時(shí)間、峰寬和分離度的影響并不大，但當(dāng)進(jìn)樣體積或者質(zhì)量很大的時(shí)候，就會(huì)造成超載現(xiàn)象，伴隨著峰寬增加、峰型變差和分離度降低。

柱長(zhǎng)在50~250mm，內(nèi)徑4~5mm的色譜柱，單個(gè)樣品的進(jìn)樣質(zhì)量應(yīng)該在50μg以?xún)?nèi)，進(jìn)樣體積小于25 μL。超載分為體積超載和質(zhì)量超載兩種，下面將分別對(duì)這兩個(gè)超載對(duì)分離的影響做介紹。

（1）體積超載：下圖分別是1mg/mL的連翹苷10、40、60、80、100 μL的色譜圖，可以看到10 μL的峰形更好，40 μL已經(jīng)出現(xiàn)前延，而隨著進(jìn)樣體積的增大，會(huì)愈發(fā)明顯。

（2）質(zhì)量超載：下圖是氨基酸及其衍生物的測(cè)定，正常質(zhì)量和超大質(zhì)量所表現(xiàn)出的峰形。

超載會(huì)影響到色譜峰形，當(dāng)進(jìn)樣體積和質(zhì)量在合適的范圍內(nèi)，是獲得良好峰形的保證，而又有哪些因素可以導(dǎo)致前延和拖尾呢，下面我們接著說(shuō)。

二、前延：（拖尾因子Tf<0.95）

1. 溶劑效應(yīng)的影響

（1）用流動(dòng)相溶解樣品：（姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品）

a.用純甲醇溶解樣品                      b.用流動(dòng)相溶解樣品   

（2）先強(qiáng)溶劑溶解樣品，然后用流動(dòng)相稀釋?zhuān)海ㄊ級(jí)A甲標(biāo)準(zhǔn)品）

2、緩沖作用不合適：（注射用苦參堿）

a. 流動(dòng)相為：乙腈：3%磷酸：無(wú)水乙醇＝80：10：10

b.流動(dòng)相為：（乙腈：3%磷酸：無(wú)水乙醇＝80：10：10）：50mM磷酸二氫鈉＝80：20

3、儀器系統(tǒng)不合適：

當(dāng)使用月旭超高效色譜柱（Ultimate? XB-C18，4.6×50mm，1.8μm）、常規(guī)的液相色譜儀搭配使用時(shí)，由于系統(tǒng)死體積大，會(huì)影響到峰形，下圖是羅氟斯特項(xiàng)目，可以看到色譜峰都出現(xiàn)了前延的現(xiàn)象。

三、拖尾：（拖尾因子Tf>1.05）

1. 降低pH，抑制硅羥基的電離

2、增加緩沖鹽，加大緩沖作用

3、因?yàn)槊糠N緩沖鹽的緩沖能力不一樣，可以通過(guò)更換緩沖鹽來(lái)調(diào)整：

4、屏蔽硅羥基的影響（如加入三乙胺）

在我們進(jìn)行定性定量的檢測(cè)分析時(shí)，色譜峰形對(duì)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有較大影響，因而保證良好的峰形，是我們實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，而排查和解決異常峰形問(wèn)題自然也是我們實(shí)驗(yàn)分析的重要技能。